Dibina antara 1510 dan 1540, katedral pertama di Amerika—dikenali sebagai Santa Iglesia Catedral Basílica Nuestra Señora de la Encarcación o Anunciación, Primada de América—terus berdiri tegak dalam semua kegemilangannya di tengah-tengah Kota Kolonial. Bangunan gaya Gothic berusia 500 tahun itu terus berfungsi sebagai tapak terpenting untuk upacara rasmi dan perayaan keagamaan. Menjelajah kawasan pedalaman mendedahkan siling Gothic berhias katedral, lukisan minyak zaman kolonial, bilik gereja suci, serta kawasan dengan batu nisan yang mengandungi jenazah ketua biskop. Jenazah Christopher Columbus ditemui di sini pada abad ke-19.
