Um dos museus mais populares da Cidade Colonial é também o seu mais impressionante em arquitectura. Completado por volta de 1512, este palácio de estilo gótico e renascentista foi outrora a casa de Diego Colombo, filho de Cristóvão Colombo, e da sua esposa Maria de Toledo, sobrinha do rei Fernando de Espanha. Com vistas sobre a Praça de Espanha de um lado, e o rio Ozama do outro, é a residência vice-regional mais antiga das Américas, e o primeiro palácio fortificado, transformado num museu com mobiliário do século XVI, arte, instrumentos musicais, e armas. Escadarias sinuosas conduzem aos quartos bem conservados do casal, e ao luxuoso salão de recepção iluminado por candelabros de cristal onde foram organizados eventos para a aristocracia espanhola.
