Salah satu museum paling populer di Kota Kolonial ini juga memiliki arsitektur yang paling mengesankan. Selesai dibangun sekitar tahun 1512, istana bergaya Gothic dan Renaissance ini pernah menjadi rumah Diego Columbus, putra Christopher Columbus, dan istrinya María de Toledo, keponakan Raja Ferdinand dari Spanyol. Dengan pemandangan menghadap Plaza de España di satu sisi, dan Sungai Ozama di sisi lain, istana ini merupakan kediaman wakil raja tertua di Amerika, dan istana berbenteng pertama, yang diubah menjadi museum yang memamerkan furnitur, seni, alat musik, dan senjata abad ke-16. Tangga yang berkelok-kelok mengarah ke kamar tidur pasangan yang terawat dengan baik, dan ke aula resepsi yang diterangi lampu kristal mewah di mana acara-acara diselenggarakan untuk aristokrasi Spanyol.
